Retina hastalıklarının ve ön segment hastalıklarının bir bölümünde tanı yöntemi olarak kullanılan fundus fluoresein anjiografide damar içine enjekte edilen fluorescite, bu tanı yöntemi için gerekli tecrübesi olan kliniklerde kullanılmalıdır. Ekstravazasyondan sakınma için gerekli önlemleri aldıktan sonra ampul içeriğini antekübital vene hızla enjekte edin. İğneyi batırın ve hasatanın kanının şırınganın ortasına kadar çekin böylece küçük bir hava kabarcığı tüpteki kanı fluoreseinden ayıracaktır. Aydınlık odada, iğnenin ucundaki deriyi gözleyerek kanı yavaşça vene geri enjekte edin. Eğer iğne ekstravazate olmuşsa hastanın kanı cilt altında toplanacak ve şişme olacaktır, bu durumda enjeksiyon hiç fluoresein enjekte edilmeden durdurulmalıdır.
Ekstravazasyon olamdığından emin olunduğunda, odanın ışıkları söndürülür ve fluoresein enjeksiyonu tamamlanır. Retina ve koroidal damarda lüminesans 9-14 saniyede ortaya çıkar ve standart izleme aletiyle gözlenebilir. Eğer muhtemel bir alerji şüphesi varsa IV uygulamadan önce intradermal olarak 0.05 ml enjekte edilir ve enjeksiyonu takiben 30-60 dak içinde ortaya çıkmasını sağlayacak bir intradermal cilt testi yapılır. Çocuklar için doz vücut ağırlığının her 4.5 kg'ı başına 35 mg olarak hesaplanır.
Venlerine zor ulaşılan hastalarda , anjiogramın erken dönemlerinin gerekmediği sistoid moleküler ödem gibi olgularda, 1gr Fluorescite oral olarak uygulanır. Boyanın göz dibinde belirmesi için genelikle 10-15 dak. gereklidir.